【48812】AIculture慧养®微生物小讲堂 常见微生物计数法汇总!

发表时间: 2024-07-05 16:15:55 作者: 染色液

  血球计数板是一种有特别结构刻度和厚度的厚玻璃片,玻片上有四条沟和两条嵴,中心有一短横沟和两个渠道,两嵴的表比两渠道的外表高0.1 mm,每个渠道上刻有不一样的规范的格网,中心0.1 mm2面积上刻有400个小方格。

  经过油镜调查,核算必定大格内微生物的数量,即可算出1毫升菌液中所含的菌体数。这种办法简洁、直观、便利,但只适合于单细胞情况的微生物或丝状微生物所发生的孢子进行计数,并且所得结果是包含死细胞在内的总菌数。

  为了补偿一些微生物在油镜下不易调查计数,而直接用血球计数板法又无法区别死细胞和活细胞的缺乏,人们发明晰染色计数法.凭借不同的染料对菌体进行恰当的染色,能够更便利的在显微镜下进行活菌计数.如酵母活细胞计数可用美蓝染色液,染色后再显微镜下调查,活细胞为无色,而死细胞为蓝色。

  将已知颗粒(如霉菌孢子或红细胞)浓度的液体与一待测细胞浓度的菌液按特别的份额均匀混合,在显微镜肆无忌惮中数出各自的数目,即可得不知道菌液的细胞浓度。这种计数办法比较粗豪,并且需求制造已知颗粒浓度的悬液做规范。

  对不知道菌样做接连十倍系列稀释,依据估计数,从最适合的三个接连的10倍稀释液中各取5毫升试样,接种1毫升到3组共 15只装培育液的试管中,经培育后记载每个稀释度呈现成长的试管数,然后查最大或然数表MPN得出菌样的含菌数,依据样品稀释倍数核算出活菌含量。该法常用于食物中微生物的检测,例如饮用水和牛奶的微生物定量查看。

  这是一种最常用的活菌计数法。将待测菌液进行梯度稀释,取必定体积的稀释菌液与适宜的固体培育基在凝结前均匀混合,或将菌液涂布于已凝结的固体培育基平板上。

  保温培育后,用平板上呈现的菌落数乘以菌液稀释度,即可算出原菌液的含菌数。一般以直径9cm的平板上呈现 50-500个菌落为宜。但办法挺费事,操作者需有娴熟的技能。

  平板菌落计数法不光能够得出菌液中活菌的含菌数,并且一起将菌液中的细菌进行了一次别离培育,获得了单克隆。

  在平板计数法的基础上,开展了小型商品化产品以供快速计数用,方式有小型厚滤纸片、琼脂片等。

  在滤纸和琼脂片中吸有适宜的培育基,其间参加活性指示剂2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC,无色)待蘸取测验菌液后置密封包装袋中培育。短期培育后在滤纸上呈现必定密度的玫瑰色细小菌落,与规范纸色板上图谱比较即可估算出样品的含菌量。

  用特别的滤膜过滤必定体积的含菌样品,经丫叮橙染色,在紫外显微镜下调查细胞的荧光,活细胞会发橙色荧光,而死细胞则发绿色荧光。

  微生物的成长伴随着一系列生理目标发生显着的改变,例如酸碱度、发酵液中的含氮量、含糖量、产气量等,与成长量相平行的生理目标许多,它们可作为成长测定的相对值。

  大多数细菌的含氮量为干重的12.5%,酵母为7.5%,霉菌为6.0%,依据含氮量×6.25,即可测定粗蛋白的含量。

  含氮量的测定办法有许多,如用硫酸、过氯酸、碘酸、磷酸等消化法和Dumas测N2气法。Dumas测N2气法是将样品与CuO混合,在CO2气流中加热后发生氮气,搜集在呼吸计中,用KOH吸去CO2后即可测出N2的量。

  将少数(干重0.2-2.0 mg)生物资料混入1毫升水或无机缓冲液中,用2毫升2%的K2Cr2O7溶液在100℃下加热30分钟后冷却。加水稀释至5毫升,在580nm的波长下读取吸光光度值,即可推算出成长量。需用试剂做空白对照,用规范样品做规范曲线)还原糖测定法

  还原糖通常是指单糖或寡糖,能够被微生物直接使用,经过还原糖的测定可直接反映微生物的成长情况,

  P,DNA,RNA,ATP,NAM(乙酰胞壁酸)等含量以及产酸、产气、产CO2(用符号葡萄糖做基质)、耗氧、黏度、产热等目标,都可用于成长量的测定。也可依据反响前后的基质浓度改变,终究产气量,微生物活性三方面的测定反映微生物的成长。

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