【48812】蛋白质印迹试验具体操作进程

发表时间: 2024-06-23 16:38:46 作者: 染色液

  蛋白质印迹免疫剖析的进程包含蛋白质经凝胶电泳分离后,在电场作用下将凝胶上的蛋白质条带搬运到硝酸纤维素膜上,经关闭后再用抗待检蛋白质的抗体 作为探针与之结合,经洗刷后,再将滤膜与二级试剂-放射性标记的或辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶 偶联抗免疫球蛋白抗体 结合,进一步洗刷后,经过放射自显影或原位酶反响来确认抗原-抗体-抗抗体复合物在滤膜上的方位和丰度。

  10.氨基黑染色液(0.1%氨基黑 -10B):0.2g 氨基黑-10B 溶于200ml 脱色液中,充沛拌和溶解,滤纸 过滤。

  按试验四操作进程进行。加样时,注意在同一块胶上按次序做一份重复点样,以备电泳结束时,一份用于免疫判定,一份用于蛋白染色显带,以利彼此比照,剖析试验成果。

  1.搬运前预备:将滤纸,硝酸纤维素膜(NC)剪成与胶相同巨细,NC膜浸入蒸馏 水中 10-20min 后浸入搬运buffer中平衡30min .

  4.开端搬运,衔接正负极,盖好盖子,接上电源,恒流 0.8mA/cm,室温下搬运1h,搬运后的凝胶再用氨基黑10B染色液染色20min ,然后脱色检测搬运作用。

  5.NC膜再转入DAB显色液中,置暗处反响,待显色反响到达最佳程度时,立即用三蒸水洗刷停止反响。