下拉试验（pull-down assay）是验证体外蛋白互作的首要方法，也是验证没有老练抗体的蛋白互作的方法之一。经过体外表达亲和蛋白-GST，将亲和蛋白固化在谷胱甘肽亲和树脂上充任“钓饵蛋白”，将细胞或许安排的总蛋白和此“诱导蛋白”混合孵育后可从中捕获“方针蛋白”，终究经过洗脱的方法将“方针蛋白”洗脱后检测，就能够剖析蛋白和蛋白互作联系。

  （2）当没有办法取得在体样本或许在体样本没有特异性一抗能够正常的运用可是又有必要进一步验证蛋白互作定论时，用到了pull down试验；

  （1）周期长，价格贵：首要是需求构建蛋白表达载体，蛋白纯化后才能做试验；许多时分蛋白不必定能够表达出来，载体也需求屡次测验；

  （2）成果可靠性：高于双荧光素酶，低于coip试验，体外将2个蛋白放一同，排除了其他的搅扰；

  惯例运用标签：GST、HIS、MBP等，对应这些标签的载体许多，惯例是PET系列（28a等）和PGEX载体系列（4T1等）；不同的蛋白在载体上表达作用不同，也有必定的或许表达在包容体中，导致没办法纯化，其间有时分需求对载体做改造促进蛋白促溶，均需求载体构建进行测验；

  （3）设置IPTG浓度，诱导时长以及诱导温度（浓度能够时0.3、0.5、0.7等，时长能够暂定16h或许12h等；温度能时28℃或许16摄氏度等都能够）

  （4）转速也会影响蛋白表达状况，能够暂定一个转速，到时刻后，离心，搜集菌体；

  （1）经过上述预试验，挑选正真合适的IPTG诱导浓度，诱导时刻以及诱导温度，进行很多培育；

  （2）搜集悉数上清，若运用GST标签蛋白，能够按GST制品纯化柱进行纯化浓度；

  （3）将孵育液流出后（收F1），用已预冷的300mL 1×PBS洗刷GST柱子约20次（6ml参加后上下盖子盖好倒置混匀，翻开流出），4℃；（流出的PBS要搜集，洗刷液搜集3管，刚开始，中心，终究，标为W1,W2,W3）

  （6）流出孵育液后（收F2），用预冷的1×PBS 200 mL洗刷大约15次；（流出的PBS要搜集，洗刷液搜集3管，刚开始，中心，终究,标为W4,W5,W6）

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