小搅扰 RNA（siRNA）转染是 RNAi 诱导基因缄默沉静的一种，是根据纳米颗粒、聚合物或脂质体的一种技能。siRNA 是双链小分子，长度为 20~24 个 bp，可特异性地降解同源 mRNA，到达按捺相应基因表达的意图。它能够人工合成，也可在细胞中天然产生，效果一般保持 3～7 天。

  稳转株全称是安稳表达细胞株，通常是指根据某一细胞系构建的继续过表达或搅扰某特定基因的细胞系，经过慢病毒感染能够将外源 DNA 克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，然后挑选得到可安稳表达意图蛋白或许安稳表达缄默沉静特定基因的细胞株。

  小鼠结肠固有层免疫细胞别离：流式细胞术使用广泛，是免疫表型及功能分析的常见试验办法。而取得高质量的单细胞悬液是流式试验成功的重要的条件。本办法以小鼠结肠固有层免疫细胞别离为例，对单细胞悬液的获取办法来进行简述。

  小鼠原代肠胶质细胞别离培育：参阅无血清培育法去除雪旺细胞培育中成纤维细胞污染的办法，结合现在已有的肠肌间神经丛神经胶质细胞原代别离、培育法的报导。

  咱们对小鼠结肠胶质细胞进行别离培育，取得了纯度较高且活性杰出的结肠肌间神经丛肠胶质细胞。

  使用荧光探针 DCFHDA 检测细胞内总 ROS 水平，DCFHDA 探针自身不带荧光，能够自在穿过细胞膜，其进入细胞后，在细胞内酯酶的效果下被水解成 DCFH，DCFH 不能穿过细胞膜，因此停留在细胞内，之后由 ROS 介导的氧化生成荧光物 DCF（激起波长 λex = 485 nm，发射波长 λem = 530 nm）。

  线粒体的首要 ROS 类型是线粒体氧化磷酸化（OXPHOS）副产物超氧阴离子。MitoSOX 是一种选择性在线粒体内长时间停留而不外漏的染色剂，其进入细胞后，会被线粒体内超氧阴离子氧化产生赤色荧光。探针的这种氧化进程可被超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）按捺。

  细胞粘附，指的是单个细胞粘附到另一个细胞或其他一些无生命体表面的才能，比方，细胞外基质。一旦细胞黏附产生反常，就会呈现严峻的病理变化，包含肿瘤的搬运、滋润和反抗凋亡等，本试验经过查验测验细胞粘附来探求细胞的搬运才能。

  以上便是丁香试验最新上线的经典试验 protocol。假如以上内容不能解决你自己的试验问题，也能进入小程序进行发问，48 小时内有问必答。海量细胞培育经历的硕博士，会替我们答疑解惑。一起来优化细胞试验吧！